全自動(dòng)核酸提取儀使用的比較常見(jiàn)的提取方法有沉淀法，離心柱法和磁珠法，提取步驟基本類(lèi)似分為裂解、洗滌和洗脫。

 

　　全自動(dòng)核酸提取儀需要注意的細(xì)節(jié)較多，一處出錯(cuò)都會(huì)導(dǎo)致結(jié)果的失敗。常見(jiàn)的問(wèn)題主要有產(chǎn)物得率低，產(chǎn)物降解或者試劑殘留。針對(duì)這些問(wèn)題，下文整理給出了具體的應(yīng)對(duì)方法，幫助大家避坑。

 

　　一、提取的核酸得率低：

 

　　樣品量與試劑的配比要控制在一定范圍，避免超過(guò)裂解能力；

 

　　破碎研磨的步驟處理細(xì)節(jié)很重要，一定要充分研磨，這是核酸提取的首要條件；

 

　　在洗脫的步驟，使用足量的洗脫液洗脫并充分混勻，避免有團(tuán)塊殘存；

 

　　實(shí)驗(yàn)耗材要匹配，如不同的吸附柱或磁珠的核酸吸附能力不同，也會(huì)影響核酸的得率。

 

　　二、提取核酸出現(xiàn)降解：

 

　　提取的樣品量要符合試劑的配比，盡量控制樣品量達(dá)到合適比例；

 

　　每個(gè)步驟都要注意充分的混合均勻，避免團(tuán)塊的殘留影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；

 

　　在洗脫時(shí)，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或者溫度過(guò)高，核酸有可能會(huì)降解；

 

　　樣本切記不可反復(fù)凍融，提取的樣本要注意在合適的溫度保存，長(zhǎng)期保存盡量-80℃。

 

　　三、提取到的核酸純度不夠高，甚至抑制物殘留影響下游實(shí)驗(yàn)：

 

　　樣本量和裂解液等試劑的配比要盡量控制到合適的范圍；

 

　　混合均勻以確保裂解充分和沒(méi)有團(tuán)塊殘留；

 

　　晾干的步驟要充分，否則可能會(huì)導(dǎo)致醇類(lèi)等雜質(zhì)的殘留；

 

　　磁棒振蕩幅度太小或混合時(shí)間太短，磁珠上有雜質(zhì)殘留會(huì)影響磁珠吸附核酸的能力。